背景

腦膠質瘤是由于大腦和脊髓膠質細胞癌變所產(chǎn)生的一種最常見的原發(fā)性顱腦惡性腫瘤,約占顱內腫瘤的35%~61%。目前,雖然有手術、放療、化療、基因治療及綜合治療等多種治療方法,但因其侵襲性強、復發(fā)率高、位置特殊、預后差,具有很高的病死率和致殘率,嚴重威脅人類健康。腫瘤細胞所處的微生態(tài)環(huán)境是其生長不容忽視的重要因素,建立一個可靠的能模擬人腦膠質瘤微環(huán)境以及生物學特性的動物模型,是進一步了解和研究膠質瘤發(fā)病機制及治療方法的基礎和前提。

01造模方法:

腦內原位接種整個接種過程在層流超凈臺進行,接種部位為裸鼠右側大腦尾狀核。裸鼠經(jīng)0.8%的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(20mL/kg),俯臥位將其頭部固定在腦立體定向儀上。75%乙醇消毒頭頂部皮膚后,先于顱中線處眼裂后開1個垂直切口,暴露前囟。接種部位取前囟中點前1mm、矢狀縫向右旁開2.5mm處,用直徑為1mm的動物顱骨鉆小心鉆穿顱骨,然后用吸有5uL瘤細胞懸液的微量進樣器經(jīng)孔垂直進人腦白質區(qū)中,進針深度為針尖距顱骨表面3.5mm,注射前將針稍微退回約0.5mm,以0.5uL/mim注射速度將瘤細胞懸液緩慢注入,除針前停留2min后緩慢拔針,用骨蠟封閉骨孔,生理鹽水沖洗術野,縫合頭皮,最后用碘酒消毒。正常對照組接種時以同體積Hanks液替代。術后先將裸鼠置于37℃恒溫板上保溫,待蘇醒后再放回籠中,術后無需抗感染治療,每天觀察其生活狀態(tài),包括精神、飲食、活動,體質量等情況。

02注意事項:

本模型制備的結果受多種因素的影響,為保證造模成功,造模過程要注意:①保證細胞活力及接種數(shù)量。保證細胞計數(shù)準確,盡量使細胞懸液的制備和裸鼠的麻醉、消毒、固定定位同時進行,以保證細胞懸液在最短時間內接種至裸鼠體內。另外,整個接種過程中要將細胞懸液置于冰上保存,用時搖勻,避免細胞貼壁、堆積,保持濃度均勻。②選擇合適的接種部位。我們將人腦膠質瘤細胞U87-MG接種于裸鼠右側大腦尾狀核,坐標為前囟中點前1mm、矢狀縫向右旁開2.5mm,深度為硬膜下3mm。選擇此注射點的目的是保證腫瘤能在該位點的前后,左右、上下方向有足夠的生長空間、從而保證腫瘤生長的大小和良好的生長形態(tài)。采取立體定向儀下準確的定位,既保證足夠的深度,又防止腫瘤細胞進入側腦室。3.防止腫瘤細胞沿針道擴散,我們采用進針3.5mm、回退0.5mm的方法,保證足夠的接種空間;0.5uL/min的緩慢注射速度、注射后停針2min和骨蠟封閉骨孔的方法,防止細胞懸液外溢,保證準確的細胞接種數(shù)量④防止動物模型感染。整個手術過程在層流超凈臺進行,術前75%乙醇消毒頭頂部皮膚,術后碘酒消毒傷口。本實驗建立人腦膠質瘤原位移植裸鼠模型的關鍵在于準確定位接種點和嚴格控制接種量,同時要特別注意注射和拔針的速度以及停針時間,只有保證了瘤細胞的接種位置和接種數(shù)量的一致性,才能確保移植縮生長的一致性、穩(wěn)定性和可比性。實驗采用的動物為免疫缺陷動物,飼養(yǎng)環(huán)境要求高。

小動物成像圖

---------------------------------------END------------------------------------

南京歐際醫(yī)藥科技服務有限公司是一家專業(yè)提供創(chuàng)新藥物研發(fā)關鍵技術解決方案的高科技服務外包公司,為國家衛(wèi)生計生委醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展發(fā)展研究中心“重大疾病防治科技行動計劃”GLP聯(lián)盟成員單位,為江蘇省藥物研究與開發(fā)協(xié)會科技服務站,為南京市海外聯(lián)誼會經(jīng)濟科技委員會主任委員單位、南京市鼓樓區(qū)“醫(yī)藥創(chuàng)新技術轉移服務平臺”。秉承創(chuàng)新、合作、服務的企業(yè)文化,公司為國內外客戶提供從轉化醫(yī)學研究、創(chuàng)新藥物設計、優(yōu)化、合成、藥物篩選、成藥性評價、新藥臨床前研究的全流程研發(fā)服務,技術平臺涉及醫(yī)學、細胞生物學、分子生物學、生物化學、免疫學、藥物化學、藥理學、藥劑學、生物信息學等多個領域。企業(yè)信用評價AAA級信用企業(yè)。創(chuàng)新改變未來,科技服務健康!

聯(lián)系我們電話:025-86616616,13770711899

Q Q:1010048624

公司網(wǎng)址:www.ogpharma.com

郵箱:service@ogpharma.com,1010048624@qq.com

實驗室地址:南京市棲霞區(qū)緯地路9號江蘇生命科技創(chuàng)新園F6棟101,103,105,107,115,528,530

長按掃碼關注